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CRISPR-Cas技术:靶向基因组编辑

背景
CRISPR-Cas技术是继ZFN、TALENs等基因编辑技术推出后的第三代基因编辑技术,引起了极大的关注。ZFN、TALENs靶向基因组修饰方法,设计成本高且耗时,限制了它们的广泛使用,特别是对于大规模、高通量研究。CRISPR-Cas系统能够实现高度灵活和特异性的靶向,可以进行修改和重定向,成为现有基因编辑和基因修饰里面效率最高、最简便、成本最低、最容易上手的技术之一,已被广泛应用于肿瘤相关基因功能的研究、肿瘤动物模型的建立和药物靶点的探索,极大地提高了人们对肿瘤基因组学的认识。
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ACROBiosystems聚焦于细胞与基因治疗领域,作为领先的重组蛋白供应商隆重推出包括CAS9、CAS12a等CAS系列蛋白,主要用于定点基因编辑等,以提供高编辑效率。

dexiconelektrik.com特点:
高酶活经过体内/体外实验验证:体外切割效率>90%,便于用 CRISPR 技术进行基因组编辑;
提供高浓度的 CAS-9 核酸酶:10mg/ml 高浓度版本,可以用于困难基因编辑条件的优化;
高纯度:通过对纯化工艺和制剂工艺摸索,获得高纯度蛋白,SDS-PAGE & MALS检测纯度>90%;
无RNA酶残留:生产过程严格控制RNA酶污染;
NLS核定位信号,能帮助蛋白递送到细胞核,提高基因组DNA的编辑效率;

dexiconelektrik.com列表:

分子 货号 dexiconelektrik.com描述 订购/预购
Cas9 CA9-S5149 NLS-Cas9 Nuclease GENPower

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Cas12a CAA-L5149 NLS-Cas12a Nuclease GENPower

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知识补充

原核生物和感染它们的病毒之间的相互作用不断演化,导致了CRISPR-Cas系统的广泛多样性。人们一般将CRISPR-Cas系统分为两类(1类和2类)。迄今为止,大多数研究人员使用的都是2类CRISPR-Cas系统,在该类中,研究最多的是Ⅱ型,也就是CRISPR-Cas9系统。

CRISPR-Cas9相关应用场景
- CAR-T治疗中的应用:
1)产生通用异基因CAR-T细胞;2)增强CAR-T细胞功能

- TCR-T细胞治疗中的应用:
把内源性TCR α和β 基因替换成具有人工肿瘤特异性TCR序列的基因

- 免疫检查点信号通路的抑制
- 肿瘤免疫治疗新靶点的筛选
CRISPR-Cas9 作用机制

CRISPR-Cas9 系统只有三个必需的组件(Cas9 以及 crRNA 和 trRNA)。可以在各种真核细胞中进行靶向基因切割和基因编辑,通CRISPR-Cas9调控机理图:通过非同源末端连接 (NHEJ) 或同源定向修复 (HDR) 内源性修复双链 DNA 断裂[1]过人工设计的 sgRNA(guide RNA)来识别目的基因组序列,并引导 Cas9 蛋白进行有效切割 DNA 双链,形成双链断裂,双链断裂可以通过细胞修复机制使用非同源末端连接或同源定向修复机制进行修复,最终达到对基因组DNA 进行修饰的目的,可以将编辑定向到几乎任何基因组位点,实现对基因功能进行高通量的研究。

CRISPR-Cas9调控机理图 CRISPR-Cas9调控机理图:通过非同源末端连接 (NHEJ) 或同源定向修复 (HDR) 内源性修复双链 DNA 断裂[1]
验证数据
高酶活
体外酶活验证:体外DNA底物切割效率>90%,与竞品相当。
NLS-Cas12a Nuclease (MALS verified)(货号:CAA-L5149 ),体外DNA底物切割效率>90%,与竞品相当。
Cas12a 体外DNA底物切割效率测定结果

Measured by its ability to cleave a targeted DNA substrate. Cas12a achieves >90% substrate cleavage, comparable to competing products

申请 Protocol

高纯度经MALS验证(>90%)
Cas12a MALS测定结果

The purity of NLS-Cas12a Nuclease (Cat. No. CAA-L5149 ) is more than 90% and the molecular weight of this protein is around 135-165 kDa verified by SEC-MALS.


 

参考文献
  • 1. Westermann L, Neubauer B, Köttgen M. Nobel Prize 2020 in Chemistry honors CRISPR: a tool for rewriting the code of life. Pflugers Arch. 2021 Jan;473(1):1-2.
  • 2. “魔剪” CRISPR/Cas9,你 get 到了吗?
  • 3. CRISPR/Cas9基因编辑在肿瘤免疫治疗中的应用


 

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